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    測定用乙醇固定的 DNA 的含量

    發布時間: 2021-12-17  點擊次數: 977次

    原理

    DNA和RNA在260nm處有一很高的吸收峰,利用這個原理我們測其OD260,再推算出其濃度。

    材料與儀器

    細胞樣品
    PBS緩沖液 70%乙醇 PI液
    離心機 恒溫箱 篩網

    步驟


    一、培養細胞的 DNA 含量的測定


    制備單細胞懸液于 200μ l 的 PBS 緩沖液中; 加入 2ml 預冷的 70%乙醇,4℃保存;


    1. 取單細胞懸液 1——2×106 個細胞于 PBS(PH=7.2)緩沖液中;


    2. 300g 離心 5 分鐘,棄上清,反復兩次;


    3. 重懸細胞于 0.5ml PBS 緩沖液中;


    4. 將細胞懸液放置于 2——3ml 冷 70%乙醇中,混勻,保存于4℃,至少30 分鐘。 在 4℃條件下可保存 2——3 周。


    2、新鮮組織的 DNA 含量的測定


    1. 用 200mg 濕重組織用機械法制成單細胞懸液;


    2. 500g 離心 5 分鐘;


    3. 棄上清,重懸于 10ml 染色- 去污劑中;


    4. 再過濾,用 200 目的篩網或 70——80μm 的篩網過濾;


    5. 上機檢測。


    3、石蠟包埋組織切片的 DNA 含量的測定


    1. 從石蠟包埋切取切片 50 μ m 厚,2——3 片,制成單細胞懸液;


    2. 用 PBS 緩沖液洗滌,500g 離心 5 分鐘,棄上清;


    3. 加入 PI 液 1ml 室溫避光 30 分鐘;


    4. 調整細胞濃度為 1×106/ml;


    5. 上機檢測。


    注意事項

    1. 根據實驗的要求,固定劑也可選用 1——3%多聚甲醛;


    2. 將乙醇作為固定劑時,乙醇應預冷至 0——4℃;


    3. 細胞在固定時,固定劑應緩慢滴入細胞懸液中,使固定劑的濃度緩慢增 加,并不斷震搖,以免細胞成團(特別是用乙醇固定時) .


    常見問題

    如果想要檢測樣品的純度,那么還要再測一次280nm處OD值,計算二者的比率,若比率接近2,說明樣品純度較高。

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