Biozellen®3D細胞培養基質膠在3D細胞球體培養試驗步驟：

A、試劑制備

1、A 基質膠：將 A 基質膠溶于 37℃水浴槽回溫 10 分鐘， 確認*融解.

2、C 緩沖溶液(1X)制備：使用前將 10X C 緩沖溶液用冰的無細胞培養液(例如： 無血清 DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

3、D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B、Biozellen®3D細胞培養基質膠的制備

全部步驟需要在無菌環境內操作，操作步驟如下：

1、將 24 孔培養板放置于冰上預冷半小時。

2、細胞計數后取 2×10^5~2×10^7 細胞與 0.5 毫升 37℃ 細胞培養基均勻混合，并與 0.5 毫升 37℃ A 膠按照 1:1 等比例均勻混合，最終細胞密度1*10^5~1*10^7cells/mL。

注：請選擇適當的培養溶液與條件進行試驗。

3、取 20-40 微升步驟 2 的混合液滴于 步驟 1 預冷的培養板上，膠體將于 5 分鐘內成膠。 注: 測試膠體是否成膠，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。

4、待膠體成膠后，添加 1 毫升冰的 1X C 緩沖溶液，并蓋過步驟 3 的膠溶液，固定 15 分鐘。

5、待 15 分鐘固定后，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養基溶液。

6、將含有細胞的膠于 37°C 二氧化碳培養箱內進行 7~14 天的培養，并觀察細胞球體的形成，按正常培養基更換頻率進行更換操作。

C、溶膠與收集細胞球體準備程序

1、小心的將培養基吸取移除，并用 1X PBS 進行清洗。

2、小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 緩沖溶液，蓋過膠滴于室溫反應 5 分鐘。

3、溫和的用 1 毫升移液管吸取，直到膠滴*溶解。

4、將含有細胞球體的溶液吸入 1.5 毫升離心管，用 1000 rpm 的轉速離心 10 分鐘，移除上清液體并收集細胞球體做分析。

D、收集單顆細胞準備程序

在分離單細胞前，先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作

1、添加 trypsin-EDTA 并與收集的細胞球體于 37°C 混合反應。

2、用 1 毫升移液管混合，直到細胞體*分解。

3、待細胞球體*分解，加入 3 倍體積的 1X PBS，并用 1000 轉的轉速進行離心 10 分鐘，并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。

Biozellen®3D細胞培養基質膠編輯

Biozellen®3D 細胞培養基質膠套裝

貨號： B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

規格： 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

保存條件：4℃保存、 保存兩年

一、產品描述

Biozellen®3D 細胞培養基質膠套裝包含整套基質膠、膠體固定液、膠體溶解液，可應用到 3D 細胞培養與微環境應用等；本試劑盒操作便利且可調控基質膠硬度進行多種細胞培養測試等；膠體可快速被固定液分解， 請操作前詳細閱讀此使用指南。

（Biozellen®3D 細胞培養基質膠套裝為植物來源，無動物源成分、不含酚紅）

二、應用

•3D 細胞球體培養

•小鼠皮下成瘤

•細胞侵襲

•適合用于 3D 細胞藥物篩檢平臺

•細胞生長和分化

•代謝/毒理學研究

三、樣本類型

•腫瘤細胞系、哺乳動物組織

四、試劑盒組分

試劑盒組分編輯

深圳市安培生物科技有限公司是美國Biozellen公司的中國代理商。Biozellen®3D細胞/類器官培養基質膠現貨供應，經驗證可*替代BD/康寧的基質膠，來源為植物源且氨基酸序列人源化，無人畜共患病的病原菌或毒素污染，提供完整售后服務和技術支持。

安培生物科技有限公司（Biozellen中國代理商）

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