產品概述：

Biozellen細胞3D培養基質膠套裝

Biozellen®基質膠特點

1、100%植物源材料，無任何動物成分；

2、胺基酸序列100%人源化 ；

3、可調控基質膠硬度進行多種細胞培養；

4、3D細胞/類器官培養種類數量范圍更廣；

5、無人畜共通病原菌或毒素風險；

6、較為適用于醫療級生物原料；

7、高活性、高純度、可融化；

8、4度運輸、4度保存；

9、2年保存時間；

10、3D培養結束后基質膠可以溫和融化，并保留3D細胞/類器官結構完整性；

Biozellen細胞3D培養基質膠套裝

Catalog No.   B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

Specification  2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

Storage       4℃保存、 保存兩年

一、產品描述

Biozellen®3D細胞培養基質膠套裝包含整套基質膠、膠體固定液、膠體溶解液，可應用到3D細胞培養與微環境應用等；本試劑盒操作便利且可調控基質膠硬度進行多種細胞培養測試；植物膠體可快速形成水凝膠， 請操作前詳細閱讀此使用指南。

（Biozellen®3D細胞培養基質膠套裝為植物來源，無動物成分）

二、應用

•3D細胞球體培養試驗

•小鼠皮下成瘤

•細胞遷移實驗

•適合用于3D細胞藥物篩檢平臺

•細胞生長和分化

•代謝/毒理學研究

三、樣本類型

•腫瘤細胞系、

四、試劑盒組分

五、使用步驟：

A、試劑制備

A基質膠：將A基質膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘， 確認*融解.

C緩沖溶液(1X)制備：使用前將10X C緩沖溶液用冰的無細胞培養液(例如： 無血清DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B、Biozellen®3D細胞培養基質膠的制備

全部步驟需要在無菌環境內操作，操作步驟如下：

1. 將24孔培養板放置于冰上預冷半小時。
2. 細胞計數后取 2×105~2×107 細胞與 0.5 毫升 37℃ 細胞培養基均勻混合，并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合，最終細胞密度1*105~1*107cells/mL。

注：請選擇適當的培養溶液與條件進行試驗。

3.取 20-40 微升步驟 2的混合液滴于 步驟 1 預冷的培養板上，膠體將于 5 分鐘內成膠。 注: 測試膠體是否成膠，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。

4.待膠體成膠后，添加1毫升冰的1X C緩沖溶液，并蓋過步驟3 的膠溶液，固定 15 分鐘。

5.待15分鐘固定后，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養基溶液。

6將含有細胞的膠于37°C 二氧化碳培養箱內進行7~14天的培養，并觀察細胞球體的形成，按正常培養基更換頻率進行更換操作。

C、溶膠與收集細胞球體準備程序

小心的將培養基吸取移除，并用1X PBS進行清洗。

小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液，蓋過膠滴于室溫反應 5分鐘。

溫和的用1毫升移液管吸取，直到膠滴*溶解。

將含有細胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管，用1000 rpm的轉速離心10分鐘，移除上清液體并收集細胞球體做分析。

D、收集單顆細胞準備程序

在分離單細胞前，先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作

1. 添加trypsin-EDTA并與收集的細胞球體于37°C混合反應。

2. 用1毫升移液管混合，直到細胞體*分解。

3. 待細胞球體*分解，加入3倍體積的1X PBS，并用1000轉的轉速進行離心10分鐘，并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。

E、細胞遷移實驗準備程序

1. 準備Transwell裝置及無血清DMEM細胞培養液 (用于稀釋A膠)。

2. A膠 (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回溫10分鐘，確認*融解。

3. 用無血清DMEM細胞培養液將A膠 (2X)稀釋50倍。

4. 根據Transwell上室底部面積加入100-120 ul/cm2稀釋后的A 膠稀釋液到Transwell上室中。

5. 將步驟4在4 ℃冰箱孵育30分鐘。

6. 將多余的稀釋液吸出，并在Transwell上室中加入無血清的癌細胞系細胞懸浮液使細胞濃度約7.5 x 104 cells/well.。

7. 在Transwell下室中加入含10 %血清的細胞培養液做為chemoattractant，吸引癌細胞系進行遷移。

F、小鼠皮下成瘤實驗準備程序

1. 將 A膠 (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回溫10分鐘，確認*融解。

2. 將C緩沖溶液(10X) 貨號:B-P-00002-C)與冰的無血清細胞培養液 (例如: 無血清DMEM或內含VEGF、heparin的無血清DMEM) 按1:4比例均勻混合配置。(例如:1 ml C緩沖溶液(10X) 與 4 ml 無血清DMEM混合，不可用PBS稀釋)

3. 將 A膠 (2X) 與約2*106 cells/ml的癌細胞系懸浮液按1:1等比例均勻混合配置，癌細胞系懸浮液最終濃度約為106 cells/ml。

4. 選用21-25 G的針頭 (避免破壞細胞)，抽取0.2-0.3 ml 預冷稀釋后的C緩沖溶液。(C緩沖溶液用于A膠成膠反應)

5. 使用步驟4的同一支針管，再抽取0.1-0.7 ml含細胞的A膠混合液，在冰上孵育五分鐘。

6. 以皮下注射方式注射0.3-1.0 ml至小鼠。(需一次注射完含C緩沖溶液的A膠混合液)

注1: 注射體積可依不同實驗目的做調整，若為血管生成研究注射體積需至少0.5 ml。

注2: 此步驟依實驗需求可執行或不執行，若需呈現明顯的皮下注射隆起效果，可于注射完畢后，在小鼠注射部位冰敷5-10分鐘

，若需呈現明顯的皮下注射隆起效果，可于注射完畢后，在小鼠注射部位冰敷5-10分鐘。

7. 培養一至三周后可摘取接種的腫瘤組織。

注3: 若為血管生成研究，應注射含VEGF及heparin的A膠，以促進血管生成。約三天后，可摘取含有新血管生成的腫瘤組織。

六、案例分享

A.形成3D腫瘤球體成功案例分享

B.Biozellen基質膠被溶解后分離的完整3D細胞結構照片

培養后的3D細胞球體， 在Biozellen基質膠被試劑盒里面的

D Buffer溶解分離后仍然可以得到完整的3D細胞結構

深圳市安培生物科技有限公司是美國Biozellen公司的中國代理商。Biozellen®3D培養基質膠大量現貨，經驗證可*替代BD/康寧的基質膠，來源為植物源且氨基酸序列100%人源化，無人畜共患病的病原菌或毒素污染，提供完整售后服務和技術支持。尊敬的客戶您如在訂購過程中遇到任何問題都可以與我司客戶經理聯系尋求幫助。